术前术后血清cfDNA中KRAS突变是胰腺癌预后的生物标志物（回顾性研究）

1背景

胰腺导管腺癌（PDAC）是一种恶性程度较高的肿瘤，其预后相对较差，5年生存率10%。KRAS基因编码RAS家族的GTP酶，而绝大多数的胰腺癌都有KRAS基因的突变，在石蜡包埋和冰冻储存的胰腺癌肿瘤组织标本中的检出率分别在67.4%和79.3%，而在血浆/血清中的检出率是40.8%。已有的研究证实，KRAS在组织中的突变与胰腺癌的不良预后有关。而液态活检有助于肿瘤的早期诊断和化疗/手术治疗反应评估。本文将KRAS突变与液态活检相结合，将术前和术后相组合，是很好的切入点。

液态活检除了血液来源之外，还有尿液、唾液、胸腔积液等可能含有肿瘤来源的遗传信息的体液检查。较为常见的检测对象有循环肿瘤细胞（CTC）、循环无细胞肿瘤DNA（cfDNA）和外泌体。本文主要涉及的是cfDNA。核酸可以通过细胞的凋亡或坏死进入血液循环，而肿瘤快速的发展进程、坏死和凋亡将导致cfDNA的水平增加。

本文通过分析PDAC术前术后的cfDNA中KRAS突变水平，来预测患者对手术的反应以及预后情况。思路清晰，检测对象是血清，相对容易获得，是临床研究中较为理想的方法。2

研究方案简介

2.1研究目的

通过分析胰腺癌术前和术后的血清cfDNA中KRAS突变水平这个生物标志物来预测手术治疗效果和预后情况。

2.2研究人群及入排标准

本研究纳入年1月至年4月共45名患者，所有的患者都明确病理诊断为导管腺癌。

排除标准包括：

(1)R2手术患者；

(2)术前或者术后没有收集到血清的患者；

2.3标本类型

（1）术前血清/血浆、术后血清/血浆—提取cfDNA

（2）石蜡包埋的组织—提取肿瘤组织的DNA

（3）胰腺癌细胞系

2.4实验技术

（1)石蜡包埋组织的DNA提取

（2）血清/血浆cfDNA的提取

（3）肽核酸（PNA）-引导下的PCR发夹技术（PNA分析法）

2.5观察指标

临床信息：年龄、性别、糖尿病史、肿瘤家族史、新辅助化疗史、手术方式、手术时间、失血量、并发症、切缘情况，肿瘤大小，胆道是否浸润，TNM分期、分级、是否新辅助化疗、淋巴结转移、辅助治疗、术前化疗、辅助治疗、首次复发部位、住院时间、无疾病生存时间、总生存时间等

实验结果：cfDNA中KRAS突变水平

2.6研究步骤

（1）利用细胞中的DNA突变情况验证PNA分析法的可靠性；

（2）利用PNA分析法分析胰腺癌患者术前和术后血清/血浆中cfDNA的KRAS突变情况，将其分为四组（术前突变pre+/术后突变post+、术前不突变pre-/术后突变post+、术前突变pre+/术后不突变post-、术前不突变pre-/术后不突变post-），构建血清/血浆中KRAS突变与预后的关系。

2.7统计分析方法

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